《表1 引物用途及序列：13个苹果NAC转录因子基因的克隆与表达分析》

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《13个苹果NAC转录因子基因的克隆与表达分析》

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采用改进CTAB法提取紫弘富士完全展开叶片的RNA[37]，用反转录试剂盒PrimeScriptTM1 ST Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA。根据已鉴定的MdNAC基因序列，设计特异性引物（表1）进行PCR扩增，PCR反应条件为：94℃预变性5 min；94℃1 min 20 s，56～60℃1 min 20 s，72℃3 min，35个循环；72℃延伸10 min。回收PCR产物并连接到pMD19-T载体上，构建重组质粒转化E.coli DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆，送至北京六合华大基因科技股份有限公司测序。