《表1 引物序列及其用途:木薯ETR1基因克隆及表达分析》

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《木薯ETR1基因克隆及表达分析》


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以木薯TUB基因为内参基因,根据MeETR1基因CDS序列设计引物QMeETR1-F和QMeETR1-R(表1),通过实时荧光定量PCR检测MeETR1基因在木薯采后PPD过程中的表达情况。实时荧光定量PCR反应体系20.0μL:荧光染料Mix 10.0μL,正、反向引物(QMeETR1-F和QMeETR1-R)各0.4μL,cDNA模板1.0μL,ddH2O补足至20.0μL。扩增程序:95℃预变性3 min;95℃30 s,58℃30 s,72℃30 s,进行40个循环;72℃延伸5 min,4℃保存。每个样品进行3次生物学重复,使用2-△△Ct法换算MeETR1基因的相对表达量(颜彦等,2018)。