《表1 引物序列及用途：大豆GmCYP82C4基因克隆与表达分析》

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《大豆GmCYP82C4基因克隆与表达分析》

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以棉花GhCYP82D1（GenBank登录号:KJ704109.1）的基因CDS序列为参比序列，在Soybase（https://www.soybase.org/）中检索，选取相似性比较高的同源序列。根据大豆品种Williams82的参考序列，利用在线网站Primer designing tool（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/）设计P450基因的PCR扩增引物和实时荧光定量引物（表1）。以正常生长条件下，第一片真叶平展期的Williams82幼苗为材料，用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒提取Williams82叶片的总RNA。cDNA第一条链的合成采用PrimeScriptTMRT Reagent Kit，逆转录反应条件为37℃30min，85℃5s，4℃保温。反转录得到的cDNA置于-20℃保存备用。