《表1 引物名称及序列:甜荞FaesFUL4基因的克隆与表达分析》

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《甜荞FaesFUL4基因的克隆与表达分析》


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根据NCBI在线数据库中已经登录的甜荞FUL同源基因序列(KM386626),设计克隆FaesFUL4基因的上、下游引物FaesFUL4F和Faes FUL4R进行PCR扩增。反应体系:cDNA模板2.0μL,高保真DNA聚合酶PrimeSTAR Max Premix(2×)*(TaKaRa)12.5μL,上、下游引物各0.5μL,用灭菌的去离子水补至25μL。PCR反应条件参照说明书进行。扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳后回收目的片段,后将其连接到pTOPO-TA(艾德莱,北京)载体上,并将重组质粒转入大肠杆菌TOP10感受态细胞(唯地生物,上海)中,挑选阳性克隆菌株经PCR检测后测序。委托生工生物工程(上海)股份有限公司进行DNA测序和引物合成(表1)。