《表1 引物名称及序列:甜玉米蔗糖合成酶基因ZmSus6和ZmSus7的克隆及组织表达特异性检测》

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《甜玉米蔗糖合成酶基因ZmSus6和ZmSus7的克隆及组织表达特异性检测》


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根据测序结果,利用Primer 5.0设计实时荧光定量PCR特异引物(表1)。利用TB Green?Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus)荧光定量PCR试剂盒,以玉米微管蛋白基因(TUB)为内参基因,在ABI 7500荧光定量PCR仪系统进行目标基因表达量检测(Galli et al.,2013)。其反应体系20.0μL:TB Green?Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus)(2×)10.0μL,10μmol/L上、下游引物各0.4μL,ROX Reference dye II(50×)0.4μL,cDNA模板20 ng,灭菌超纯水补足至20.0μL。扩增程序:95℃预变性5 min;95℃5 s,60℃30 s,进行40个循环。每个样品重复3次。