《表1 引物序列：栽培黑果枸杞活性成分生物合成关键基因克隆及表达分析》

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《栽培黑果枸杞活性成分生物合成关键基因克隆及表达分析》

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利用已设计的特异引物（表1）对4种关键酶基因进行PCR扩增，测序后分别获得大小为1 140bp、1 251 bp、1 002 bp和1 017 bp的DNA序列，分别编码大小为379、416、333和338 aa的蛋白质。蛋白质分析表明4种编码蛋白的分子量/等电点分别为42.3 KDa/6.15、46.6 KDa/5.55、37.5 KDa/6.26和36.7 KDa/6.33。氨基酸序列分析表明LrDFR与其他植物DFR存在高度保守的NADPH基序，但22位的Ala与部分物种的Ser存在差异（图3)；LrANS与其他植物ANS均存在DIOX＿N和2OG-FeⅡ＿Oxy两个保守结构域，且组氨酸（His，H）、精氨酸（Arg，R）、天冬氨酸（Asp，D）和谷氨酸（Glu，E）残基在2OG-FeⅡ＿Oxy结构域高度保守（图4)；LrLAR与其他植物LAR存在3个保守结构域，分别是RFLP、ICCN和THD，但也存在部分差异（图5)；LrANR与其他植物ANR也存在高度保守的NADPH基序（图6）。