《表1 研究所用引物序列:番茄SlTIP-1基因的克隆、表达及启动子活性分析》

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《番茄SlTIP-1基因的克隆、表达及启动子活性分析》


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下划线分别为Bam HI和Sac I的酶切位点序列。

本文基于番茄表达芯片数据,利用直系同源基因比对,快速筛选获得一个根特异表达基因Sl TIP-1。根据SlTIP-1 cDNA序列,设计一对含有酶切位点(Bam HI和Sac I)的特异性引物:SlTIP-1-F、Sl TIP-1-R(表1)。以番茄根cDNA为模板进行PCR扩增,50μL PCR反应体系由2μL SlTIP-1-F(10μmol·L-1)、2μL SlTIP-1-R(10μmol·L-1)、25μL2×A8 FastHiFi PCR MasterMix、20μL ddH2O和1μL cDNA组成。反应条件为94oC 5 min;94oC 30 s,55oC 30 s,72oC 50 s,总计30个循环;72oC延伸10 min。