《表1 所用引物序列：青杄转录因子PwNAC30及其启动子序列的克隆与表达分析》

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《青杄转录因子PwNAC30及其启动子序列的克隆与表达分析》

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注:下划线表示酶切位点Note:Restriction sites are underlined

设计特异性引物PwNAC30-pBI121-F和PwNAC30-pBI121-R（表1），以构建的PwNAC30启动子pEASY-T1载体为模板，经过PCR、酶切、连接等步骤，将PwNAC30的启动子克隆到pBI121载体上（切除pBI121自身的CaMV35S启动子序列），构建重组表达载体PwNAC30-QDZ-pBI121。通过转化，将重组载体PwNAC30-QDZ-pBI121和pBI121空载体转入农杆菌GV3101中，通过菌落PCR鉴定阳性菌落。挑单独的阳性菌落于1.5mL YEB培养基中（50μg·mL-1卡那霉素+20μg·mL-1利福平），28℃、180r/min摇床中过夜培养，至OD600为1.0，吸取1mL菌液至离心管，3 000r/min离心5min集菌，用1 mL本生烟草注射缓冲液（10mmol·L-1 MES，10mmol·L-1氯化镁，100μmol·L-1乙酰丁香酮，pH为5.7）将菌重悬，3 000r/min离心5min，弃上清，重复3次，至OD600=0.6。