《表3 引物序列：菊芋果聚糖合成酶基因1-FFT启动子克隆与功能分析》

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《菊芋果聚糖合成酶基因1-FFT启动子克隆与功能分析》

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PCR扩增使用高保真酶High-fidelity Phusion DNA polymerase（Thermo-Fisher Scientific）在GeneA-mp PCR System 9700（Applied Biosystems）梯度PCR扩增仪进行。反应程序为：98℃2 min；98℃10 s，62℃30 s，72℃2 min，32个循环；72℃10 min。Tail-PCR根据已知的FFT序列，在其5'端设计3个反向的巢式引物SP1、SP2和SP3。参考文献选择4个简并引物AD1-4（表3）。以10 ng的基因组DNA为模板，3个特异巢式引物与任一种随机引物进行Tail-PCR扩增（反应体系及反应条件按文献进行）。反应产物通过琼脂糖凝胶上进行电泳分离检测，将目的基因切胶后利用琼脂糖凝胶回收试剂盒（Tiangen）回收。将回收片段加A后连接至PGEM-Teasy载体（Promega Corporation）上，转化大肠杆菌DH5α，检测得到的阳性克隆送至华大公司测序。