《表2 ApCathB启动子克隆引物序列》

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《百子莲ApCathB启动子克隆及其对超低温保存的响应分析》

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主要实验材料为百子莲（Agapanthus praecox ssp.orientalis'Big Blue'）胚性愈伤组织。应用染色体步移法克隆ApCathB启动子序列。以百子莲DNA为模板，应用Genome Walking Kit（TaKaRa）试剂盒中提供的随机引物AP1为正向引物，ApCathB基因特异性嵌套引物SPn为反向引物，进行3次热不对称PCR反应。对第三次扩增获得的预期片段进行回收，连接pMD19-T载体测序，将测序正确的片段与DNA拼接。在此基础上再次设计引物SP4～SP6，重复上述PCR反应，直至获得ApCathB基因上游2 000 bp以上的序列为止。PCR引物由上海生工有限公司合成（表2）。