《表1 引物序列：五味子PLR基因及其启动子的克隆与表达分析》

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《五味子PLR基因及其启动子的克隆与表达分析》

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利用Primer 5.0在其5’端设计3个反向的巢式引物Sc PLR-R1、ScPLR-R2和ScPLR-R3（表1），采用高保真酶Prime STAR Max DNA Polymerase(Takara）进行3轮PCR扩增。PCR反应体系25μL:1μL基因组DNA，AD上游引物0.5μL，R1或R2或R3 1μL，Tap酶混合反应液12.5μL，10μL ddH2O。PCR反应条件：（93℃、1 min→95℃、1min）×1→（94℃、30 s→62℃、1 min→72℃、2 min）×1→（94℃、30 s→25℃、1 min→72℃、2 min；94℃、30 s→62℃、1 min→72℃、2 min）×1→（94℃、30 s→62℃、1 min→72℃、2 min；94℃、30 s→44℃、1 min→72℃、2 min）×15；72℃、5 min。3轮PCR产物经纯化后，将其连接到pMD19-T载体上，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，涂平板后，37℃培养12～16 h，挑取白斑，摇床培养后提取质粒，PCR验证后测序。