《表1 引物及其序列：朵丽蝶兰‘Tinny Tender’DhGA2ox基因克隆与表达分析》

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《朵丽蝶兰‘Tinny Tender’DhGA2ox基因克隆与表达分析》

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与线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列用小写字母表示，基因特异性扩增序列用大写字母表示。

用TRIzol法提取朵丽蝶兰各部位RNA，用PrimeScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）试剂盒反转录合成cDNA。以蝴蝶兰基因组序列PEQU＿27177为质询序列，在兰科转录组数据库（http://orchidstra2.abrc.sinica.edu.tw/orchidstra2/index.php）进行BLAST分析，经筛选获得PATC064840同源序列。利用Primer 5.0设计Dh GA2ox开放阅读框（open reading frame，ORF）区的1对特异性引物GA2ox-F和GA2ox-R（表1），由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR反应程序:94°C预变性5 min；94°C变性30 s，57°C退火30 s，72°C延伸50 s，35个循环；72°C延伸8 min。获得的目的片段连接到pMD18-T Vector（TaKaRa公司，南京）载体上，命名为pMD18-DhGA2ox重组质粒，将其转化到大肠杆菌[Esche- richia coli（Mig.）Cast.&Chalm.]DH5α菌株（本实验室保存）中，经蓝白斑筛选、菌落PCR以及质粒酶切鉴定，确定为阳性克隆后，送到生工生物工程（上海）股份有限公司测序。