《表1 引物序列：芒果MiCOL6基因的克隆及其生物信息学和表达分析》

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《芒果MiCOL6基因的克隆及其生物信息学和表达分析》

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根据基因序列设计荧光定量PCR引物qCOL6u和qCOL6d（表1），定量内参基因为芒果的Actin1。Actin的上游和下游引物见表1，实时荧光PCR扩增每个样重复3次，同时设空白对照和阴性对照。荧光定量仪器为ABI7500型PCR仪。扩增反应程序参照试剂盒SYBR Premix Dimer Eraser(TaKaRa）说明书进行。以50μg/L的cDNA为模板，反应体系20μL:cDNA 2μl，上下游引物0.4μL，SYBRⅡ10μL，ROXⅡ0.4μL，超纯水6.6μL。PCR程序如下：95℃30 s，Ⅱ95℃5 s和60℃34 s 40个循环，95℃15 s，60℃1 min，95℃15 s。qRT-PCR的数据分析采用2-ΔΔCT法。