《表1 引物序列：川西云杉几丁质酶基因PlCHI的克隆、表达与生物信息学分析》

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《川西云杉几丁质酶基因PlCHI的克隆、表达与生物信息学分析》

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采用RNA提取试剂盒提取川西云杉总RNA，并反转录成cDNA。参考NCBI数据库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中云杉属其他植物几丁质酶基因的核苷酸序列，采用Primer 5.0软件设计川西云杉Pl CHI基因的特异性引物Pl CHI-F和Pl CHI-R（表1）并进行PCR扩增，程序如下:94℃预变性3 min，94℃变性30 s，54℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，共40个循环；最后72℃延伸7 min，于4℃保存。扩增产物经回收、纯化后与pMD 19-T载体连接。将重组质粒pMD 19-T-Pl CHI转入DH5α感受态细胞，阳性克隆经鉴定后送测序。