《表3 引物序列：枸杞Lb14-3-3基因家族cDNA克隆及生物信息学分析》

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《枸杞Lb14-3-3基因家族cDNA克隆及生物信息学分析》

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根据枸杞花药发育蛋白质组学鉴定的14-3-3蛋白的肽段序列信息，利用软件Primer 5.1设计引物，引物由上海生工生物有限公司合成（表3）。以-20℃备存的枸杞花药cDNA为模板进行PCR扩增，反应体系的总体积为50μL，含有25μL 2×Master Mix、2μL上游引物（引物浓度为10μmol/L）、2μL下游引物（引物浓度为10μmol/L）、2μL DNA模板和19μL ddH2O。扩增条件为：94℃预变性3 min；94℃变性1 min，退火1 min（Lb14-3-3a，Lb14-3-3b，Lb14-3-3c，Lb14-3-3d和Lb14-3-3e基因的退火温度分别为48℃，53℃，48℃，58℃和58℃），72℃延伸1 min，35个循环；72℃10 min，PCR产物经切胶回收后连接至pGEM-T Easy载体转化大肠杆菌DH5α，将阳性质粒菌液送上海生工生物工程公司测序。