《表1 引物序列信息：芒果MiFRI1和MiFRI2基因的克隆与表达分析》

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《芒果MiFRI1和MiFRI2基因的克隆与表达分析》

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以芒果Mi Actin1为内参基因[15]，根据基因序列设计荧光定量引物（表1），分别提取芒果不同部位的总RNA，采用宝生物工程（大连）有限公司的M-MLV逆转录酶合成c DNA第一链，实时荧光定量PCR所用仪器为ABI 7500 Real Time PCR仪（Applied Biosystems，美国加利福尼亚），反应体系和程序参照SYBR?Premix Ex TaqⅡ试剂（Ta Ka Ra，中国大连）说明书。具体如下：以50μg/L的c DNA为模板，反应体系（20μL):SYBRⅡ10μL，ROXⅡ0.4μL，c DNA 2μL，上下游引物各0.5μL，超纯水6.6μL。反应程序为：95℃预变性30 s；95℃变性5 s，60℃退火34 s，40个循环；循环结束后95℃15 s，60℃1 min，95℃15 s进行熔解。每个样品重复3次，采用2-（35）（35）CT法[16]计算基因的相对表达量。使用SPSS22.0软件对数据进行差异显著性分析（P<0.01），用Excel 2016绘制表达图。