《表1 ISP-Ⅱ基因克隆和表达分析所用的引物序列》

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《投喂人工配合饲料对大口黑鲈ISP-Ⅱ基因表达的影响》

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根据测定的ISP-Ⅱc DNA序列，避开大口黑鲈ISP-Ⅱ的保守区，计用于荧光定量PCR扩增的引物ISP-F2和ISP-R2 （表1）。以EF作为内参基因（表1），以喂食冰鲜鱼组大口黑鲈肝、肠、幽门垂、胃、脑、性腺、心脏、肾脏、肌肉、眼和鳃组织的c DNA为模板，采用的反应体系为20μL的反体积中，包含1μL c D-NA模板、10μL SYBR Premix Ex TaqⅡGreen Master Mix （Ta Ka Ra，China）、正反引物（10 mmol/L）各0.8μL、0.4μL ROX Dye和7μL dd H2O。反应程序为95℃，30 s；95℃，5 s；60℃，30 s，40个循环。用ABI7300型荧光定量PCR仪检测ISP-Ⅱm RNA在各组织的表达量，将得到的Ct值采用2-ΔΔCt的表方法计算ISP-Ⅱ的相对表达量。选择表达量的标准偏差小于表达量平均值的50%的表达相对稳定的组织，分析ISP-Ⅱm RNA在喂食人工配合饲料组的表达水平，并与冰鲜组进行比较，用SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析，检测其显著性。