《表2 马尾松PmWRKY164基因cDNA克隆及表达分析所用引物及其序列》

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《马尾松PmWRKY164基因的克隆及耐低磷功能分析》

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UBC:泛素结合酶；GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶；下同

基于马尾松低磷胁迫RNA-Seq数据（本课题前期已获得）（Fan et al.，2014） ，筛选到了1个马尾松WRKY164的Unigene，利用Unigene片段设计的特异引物（表2），以样本cDNA为模板进行PCR扩增。反应体系为5'-RACE-Ready cDNA&3'-RACE-Ready cDNA 2.5μL，UPM（10×）5μL，GSP-F&GSP-R（10μmol/L）1μL，Master Mix 41.5μL。反应条件:94℃30 s；68℃30 s，72℃3 min，30个循环。巢式PCR反应体系:第1轮PCR产物（稀释50倍）5μL，UPM Short 1μL，NGSP-F&NGSP-R（10μmol/L）1μL，Master Mix 41.5μL。反应条件:94℃30 s；63℃30 s，72℃3 min，20个循环。扩增PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测、切胶回收、连接转化、克隆后送至上海生工生物公司进行测序验证。经分析、拼接后获得PmWRKY164 cDNA全长。