《表1 本研究所用引物：澳洲宝石鲈热休克蛋白90-β基因（HSP90-β）的cDNA克隆与表达》

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《澳洲宝石鲈热休克蛋白90-β基因（HSP90-β）的cDNA克隆与表达》

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在NCBI（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/nuc-core）中查找鲈形目鱼类HSP90-β的编码序列，并用DNAssist(2.2）进行序列比对。找出保守序列，并参照简并引物替换表设计简并引物，使用高保真酶KOD One PCR Master Mix-Blue(TOYOBO，日本）进行PCR。反应条件为95℃，1 min，1个循环；98℃，10 s，1个循环；（98℃，10 s；55℃，30 s；68℃，5 s），40个循环；68℃，5min，1个循环；4℃，∞。将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，并将目的条带切胶回收，经测序得到核心片段序列，并参照该序列设计RACE引物。使用Td T转移酶法进行RACE，引物AP用于3'RACE模板的制作，引物AAP用于5'RACE模板的制作。将5'RACE、3'RACE扩增得到的序列与NCBI数据库序列进行比对，确认得到目的序列后，将其与核心片段序列拼接得到完整的c DNA序列，并从该序列上设计引物扩增得到完整的CDS。引物详见表1。