《表1 本研究所用引物：烟蚜热激蛋白基因MpHsp70的克隆及在UV-B胁迫下的表达分析》

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《烟蚜热激蛋白基因MpHsp70的克隆及在UV-B胁迫下的表达分析》

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通过对已知同源昆虫Hsp70序列比对，在保守区设计1对简并引物MpHsp70-F/Mp Hsp70-R（表1），以合成的cDNA第1链为模板扩增烟蚜MpHsp70基因中间片段。PCR反应体系为50μL:TaKaRa Ex Primer TaqTM酶（1.25μmol/25μL）25μL，cDNA模板（200 ng/μL）2μL，正反向引物（10μmol/L）各2μL，ddH2O 19μL。反应条件:94℃3 min；94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，35个循环；72℃5 min。用1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，用TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0试剂盒（TaKaRa公司）纯化回收目的片段，连接载克隆载体pMDTM18-T载体（Ta Ka Ra公司）上并转化至感受态细胞DH5α（Ta Ka Ra公司），经蓝白斑筛选，挑取单一菌落做菌落PCR检测并测序（上海生工生物工程技术有限公司）。