《表1 本研究所用引物:油茶自交、异交雌蕊脯氨酸含量及相关基因克隆表达分析》

《表1 本研究所用引物:油茶自交、异交雌蕊脯氨酸含量及相关基因克隆表达分析》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《油茶自交、异交雌蕊脯氨酸含量及相关基因克隆表达分析》


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从油茶雌蕊全长转录组数据库中获得P5CS、P5CR、P5CDH和Pro DH基因的全长编码序列(coding sequence,CDS),其开放阅读框分别为2 154、834、1 656和1 473 bp。利用Primer Premier 5.0软件设计4对特异引物:P5CS-F和P5CS-R、P5CR-F和P5CR-R、P5CDH-F和P5CDH-R、ProDH-F和ProDH-R,并进行反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增(表1)。PCR反应体系(50μL):5×PrimeSTAR Buffer(Mg2+plus)10μL、dNTP Mixture 4μL、正反向引物各1μL、模板cDNA(SP72)1μL、Prime STAR HS 0.5μL,补充双蒸水(dd H2O)至50μL。反应程序:98°C 3 min;98°C 10 s,56°C 5 s,72°C 2 min,35个循环;72°C 7 min;4°C保温。