《表1 本研究所用引物：红麻海藻糖生物合成关键酶基因HcTPPJ的克隆及响应逆境的表达分析》

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《红麻海藻糖生物合成关键酶基因HcTPPJ的克隆及响应逆境的表达分析》

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参照多糖多酚植物总RNA提取试剂盒[天根生化科技（北京）有限公司]说明书提取红麻叶片总RNA，然后逆转录合成c DNA作为基因克隆的模板。根据转录组Unigene序列（编号:CL541.Contig2），利用Primer Premier 5.0设计Hc TPPJ基因全长扩增引物Hc TPPJ-F/R （表1）。Hc TPPJ基因全长扩增PCR反应体系包含2.5μL 10×LA PCR buffer （Mg2+plus）、0.25μL LA Taq酶（Ta Ka Ra）、1μL 2.5 mmol L-1d NTP、0.25μL 10μmol L-1 Hc TPPJ-F、0.25μL 10μmol L-1 Hc TPPJ-R、20 ng c DNA，dd H2O补足25μL。Hc TPPJ基因全长扩增PCR反应程序为94℃预变性2 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸90 s，30个循环；72℃延伸3 min，4℃终止反应。反应产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。参照琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒[天根生化科技（北京）有限公司]的说明书切胶回收，然后将回收片段连接到p MD19-T载体上，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取阳性菌落送生工生物工程（上海）有限公司测序。