《表1 引物序列：羊草DHN3基因的克隆及其逆境响应的表达分析》

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《羊草DHN3基因的克隆及其逆境响应的表达分析》

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采用软件Primer Premier 5.0，设计LcDHN3基因的全长扩增引物LcDHN3-F/LcDHN3-R（表1）。以羊草cDNA为模板，进行RT-PCR扩增，扩增体系为:5×PrimeSTAR缓冲液10μL，dNTPs（2.5mmol/L）4μL，正反向引物（10μmol/L）各1μL，cDNA 1μL，PrimeSTARHS DNA聚合酶0.5μL，ddH2O 32.5μL。扩增程序为:98℃预变性1min；98℃变性10s，56℃退火10s，72℃延伸40s，30个循环；72℃补充延伸5min，16℃保存。目的PCR产物经凝胶回收试剂盒（天根）回收后，与pEASY-Blunt Simple载体（全式金）连接，将连接产物转化大肠杆菌DH5α，通过蓝白斑筛选后利用M13引物进行菌落PCR验证，将阳性克隆进行测序验证。