《表1 引物序列：发菜磷酸葡糖胺变位酶(glmM)对干旱胁迫的响应及其基因克隆》

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《发菜磷酸葡糖胺变位酶(glmM)对干旱胁迫的响应及其基因克隆》

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注:双下划线:上，下游引物5'端添加的保护碱基；单下划线:Bam HⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点

根据杨佳等（2015）的方法提取不同干旱胁迫条件下的发菜总RNA，按照25℃10 min，50℃30 min，85℃5 min的程序逆转录为cDNA。按照实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）引物设计要求设计发菜glmM引物qRT-PCR-P1和qRT-PCR-P2，内参基因16S rRNA引物16S rRNA-P1和16S rRNA-P2（表1）。在ABI Stepone plus型荧光定量PCR仪中进行反应，按照95℃10 min，94℃15 s，57℃15 s，72℃25 s，35个循环，最后72℃10 min进行扩增。每个反应3次重复，相对表达量的分析采用2-ΔΔCt方法（Livak and Schmittgen，2001；石晶等，2018）。