《表1 引物信息:东海1号大黄鱼SCD-1a和SCD-1b基因克隆及其对低温胁迫的应答》

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《东海1号大黄鱼SCD-1a和SCD-1b基因克隆及其对低温胁迫的应答》


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从Gen Bank中检索鱼类SCD序列(斑马鱼Danio rerio,NM_198815.2;团头鲂Megalobrama amblycephala,KF918746.1;鲈鱼Dicentrarchus labrax,FN868643.1;莫桑比克罗非鱼Oreochromis mossambicus,AY150696.1;虱目鱼Chanos chanos,AY082003.1),经序列对比后根据保守区域设计兼并引物v-SCD-1a;根据本实验室大黄鱼巨噬细胞转录组测序数据中的SCD-1b基因部分序列设计引物v-SCD-1b;以肝脏c DNA为模板,经PCR扩增大黄鱼SCD-1a和SCD-1b基因核心序列。引物序列见表1。PCR反应体系:模板c DNA 1.0μL,2×Taq Premix 10μL,10μmol/L上下游引物各1.0μL,dd H2O 7.0μL。PCR反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸1 min,30个循环;72℃延伸10 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测后送至上海立菲生物技术有限公司测序。