《表1 引物序列：多花黄精几丁质诱导赤霉素应答基因（CIGR）克隆及其功能》

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《多花黄精几丁质诱导赤霉素应答基因（CIGR）克隆及其功能》

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根据筛选获得cDNA序列运用DNAMAN6.0软件设计扩增引物，以多花黄精的cDNA为模板进行PCR扩增获得多花黄精的CIGR的cDNA序列.参考从转录组中获得的野生黄精候选CIGR基因cDNA序列，利用ORF全长验证引物以多花黄精叶片cDNA为模板，扩增CIGR cDNA全长序列（表1).PCR反应的体系为25μL，Dream Taq TM Green PCR Master Mix(2×）12.5μL，ddH 2 O 9.5μL，上、下游引物各1μL（浓度10μmol/L），模板cDNA 1μL.94℃预变性5 min；94℃变性30s，55℃退火30 s，72℃延伸1:40 s，35个循环；最后72℃延伸10 min.获得的目的片段采用Gel/PCR Extraction Kit试剂盒进行回收纯化，再进行TA克隆，并挑阳性单克隆子进行菌液PCR，将检测含有目的条带的菌液送于铂尚生物技术有限公司进行测序.