《表1 引物及其序列：‘云香’水仙NtNAC2基因的克隆及功能分析》

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《‘云香’水仙NtNAC2基因的克隆及功能分析》

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注:下划线为酶切位点Note:Underlined sequences are the enzyme digest sites

采用农杆菌介导法[25]转化烟草，将双酶切验证及测序正确的重组质粒经冻融法转化到根癌农杆菌GV1301菌株中，侵染切成1~2cm2烟草叶盘（组培苗龄5~6周）。暗培养3d后置于含抗生素10 mg/L Hyg（潮霉素）的MS培养基上筛选抗性芽，选取生长良好的抗性芽转入抗生素减半的1/2MS生根培养基诱导生根，约50d后进行炼苗移栽。选用TransDirect Plant Tissue PCR Kit（TRAN）试剂盒提取抗性烟草植株DNA，用于PCR检测，获得的阳性植株幼叶用GUS染色，并在显微镜下观察显色结果。进一步提取阳性株系总RNA，烟草内参引物选用TbActin-F和TbActin-R（表1），RT-PCR检测NtNAC2是否过表达。