《表1 引物序列:丹波黑大豆GmMATE2基因的克隆及功能鉴定》

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《丹波黑大豆GmMATE2基因的克隆及功能鉴定》


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斜体部分为保护碱基,下划线部分为酶切位点

侵染烟草叶片的农杆菌OD600=0.5,在含有新霉素(neomycin,Neo)(鼎国生物技术有限责任公司) 抗性的MS培养基上培养分化长大后,用十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法提取的烟草总DNA,用检测引物JcGmMATE2F和JcGmMATE2R(表1)进行PCR扩增,检测GmMATE2插入烟草基因组的情况。用RNAiso Plus提取烟草根RNA,反转录合成cDNA,进行RT-PCR扩增,检测GmMATE2的表达情况,上述反应体系均为20μL:r Taq Mix(TaKaRa,大连)10μL,模板1μL,上、下游引物(10 mmol/L)各0.5μL,ddH2O补足20μL,反应程序:94℃,5 min;(94℃,30 s;56℃,30 s;72℃,1 min)32个循环;72℃,10 min,扩增片段长度822 bp。