《表1 本研究所用引物：苹果酰基辅酶A结合蛋白4基因MpACBP4的克隆及功能鉴定》

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《苹果酰基辅酶A结合蛋白4基因MpACBP4的克隆及功能鉴定》

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取苹果砧木M26的根、茎和叶的总RNA采用uper Script TM III First-Strand Synthesis System for RT-PCR（Invitrogen)试剂盒进行c DNA的合成，作为后续克隆的模板。根据苹果基因组序列数据库中的ACBP4基因序列，通过Primer Premier 5.0软件进行设计引物Mp ACBP4-F和Mp ACBP4-R （表1）。PCR扩增的反应体系为25μL；2×Eco Taq PCR Sup e r M i x D N A聚合酶12.5μL，上下游引物（1 0μmol·L-1）各1μL，c DNA (<100 ng）1μL，dd H2O 9.5μL。PCR扩增程序为95oC预变性5 min，95oC变性30 s，55oC退火1 min，72oC延伸100 s，共40个循环；最后再72oC延伸10 min。扩增得到的产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，目的片段用Axy Prep DNA凝胶回收试剂盒回收并连接至克隆载体p BI121，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，将经检测呈现阳性克隆菌液送上海生工生物工程股份有限公司测序。