《表1 本文所用引物：梨咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因PbCCoAOMT1的功能验证》

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《梨咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因PbCCoAOMT1的功能验证》

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*下划线部分为酶切位点。

梨果实总RNA的提取方法按照多糖多酚植物总RNA提取试剂盒说明书进行。根据梨基因组Pb CCo AOMT1 (Pbr034039.1）序列信息[10]及载体p CAMBIA1301a图谱上的多克隆位点，利用Primer Premier 6.0软件设计Pb CCo AOMT1带酶切位点的正反向引物Pb CCo AOMT-ZH-F、Pb CCo AOMT-ZH-R（表1）。利用该引物克隆Pb CCo AOMT1的CDS全长，PCR反应程序为：94℃预变性3 min；94℃变性30 s；51℃退火30 s；72℃延伸45 s，35个循环；72℃延伸10 min。将目的条带的胶回收产物和p MD18-T载体连接，测序无误后，将p MD18-T-Pb CCo AOMT1质粒和p CAMBIA1301a载体分别用Bam H I和Pst I进行双酶切，并通过T4连接酶进行连接，构建并成功获得重组真核表达载体p CAMBIA1301a-Pb CCo AOMT1。测序无误后通过电转化法导入农杆菌EHA105。