《表1 试验所用引物：马铃薯类糖基转移酶基因StKOB1的克隆与功能分析》

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《马铃薯类糖基转移酶基因StKOB1的克隆与功能分析》

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注:下划线处是酶切位点。Note:Underline shows the restriction site.

将StKOB1序列经BLAST比对获得本氏烟草中的同源基因NbKOB1，再以NbKOB1序列设计用于VIGS体系的引物（表1），以本氏烟草cDNA为模板，采用Pfu酶进行PCR扩增。用EcoRⅠ和Bam HⅠ限制性内切酶酶切扩增片段和TRV2载体，回收后分别连接、转化大肠杆菌DH5α。得到的转化子用TRV载体通用引物（表1）进行PCR检测，筛选成功插入目的片段的阳性克隆并测序（昆明擎科生物科技有限公司）。利用电脉冲法[22]将测序正确的重组质粒（TRV-NbKOB1）转化到农杆菌GV3101菌株中。