《表1 引物序列：岗梅磺酸基转移酶基因的克隆与体外表达》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《岗梅磺酸基转移酶基因的克隆与体外表达》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

表引物序列波浪线部分为酶切位点，双下划线部分为载体同源臂，单下划线部分为基因同源臂

以上述pEASY-IaST1质粒为模板，以eIaST1-F和eIaST1-R（表1）为引物，用高保真酶进行PCR扩增，PCR的反应条件为:98℃保持2 min，98℃变性10 s、55℃退火15 s、72℃延伸10 s，35个循环，72℃保持5 min，4℃保存。PCR产物纯化后，用限制性内切酶Eco R V、Xho I对载体pET-32a（+）与PCR纯化产物进行双酶切处理，将酶切产物分别切胶回收，将IaST1连接到pET-32a（+）载体上，转化E.coli Trans1-T1，经抗性筛选获得阳性克隆，测序。同法操作，以pEASY-IaST2质粒为模板，eIaST2-F和e IaST2-R为引物，扩展获得IaST2基因片段，通过In-FusionTM克隆将IaST2连接到线性化的pET-32a（+）载体上，转化E.coli筛选阳性克隆，测序。将序列正确的阳性克隆扩大培养，提取得到质粒pET-32a-IaST1、pET-32a-IaST2，在2个基因的3’-端均插入了编码6×His的核苷酸序列。