《表1 引物序列：长白落叶松过氧化氢酶LoCAT1基因克隆及表达分析》

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《长白落叶松过氧化氢酶LoCAT1基因克隆及表达分析》

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从长白落叶松转录组数据库中获得CAT1基因的全长序列，利用Primer5.0软件设计引物（表1），引物由上海生工生物公司有限公司合成。以整株的RNA反转录所得的cDNA为模板，采用KOD-FX PCR酶进行PCR扩增。PCR反应体系（50μL）:上下游引物各1.5μL，模板cDNA 1μL，KOD FX 1μL，ddH2O 10μL，2 mmol·L-1d NTPs10μL，2x PCR buffer for KOD FX 25μL。扩增条件:94℃，2 min；98℃，10 s，58℃，30 s，68℃，55 s，35个循环；68℃，10 min。1%琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测并回收目的片段，将目的片段与pROK-Ⅱ载体连接，并转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中，卡那霉素（50 mg·L-1）筛选阳性转化子。PCR检测后将阳性结果送上海生工测序。