《表1 GST引物序列:百合谷胱甘肽-S-转移酶基因(LotGSTL)的克隆及原核表达》
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《百合谷胱甘肽-S-转移酶基因(LotGSTL)的克隆及原核表达》
根据转录组的测序结果,使用Oligo 7.0、Primer 5和DNAMAN软件,依据Tm值、二聚体多少、引物形成的结构和GC含量为主要参考数据,进行3'RACE外引物(3'GSP)和内引物(3'NGSP)的设计,引物由北京华大基因公司合成(表1)。参照TaKaRa公司3'RACE、5'RACE试剂盒说明书进行PCR扩增,扩增结果由北京博迈德基因技术有限公司进行测序并拼接。根据最大开放阅读框(opening reading frame,ORF)设计全长PCR扩增引物,由cDNA模板进行扩增。经过1%琼脂糖凝胶电泳后,用TaKaRa公司的DNA回收试剂盒说明书进行切胶回收;用pMD19-T Vector进行连接转化,挑取阳性菌斑后测序。将测序结果在NCBI上比对,来验证获得的基因序列。其中所有PCR程序如下:
图表编号 | XD00103578400 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.10.28 |
作者 | 边晓天、邵杨、张克中、崔金腾、葛伟、贾月慧 |
绘制单位 | 北京农学院园林学院、北京农学院园林学院、北京农学院园林学院、北京农学院城乡生态环境北京实验室、北京乡村景观规划设计工程技术研究中心、北京农学院园林学院、北京农学院城乡生态环境北京实验室、北京乡村景观规划设计工程技术研究中心、北京农学院园林学院、北京农学院城乡生态环境北京实验室、北京农学院植物科技学院 |
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