《表1 引物序列：枸杞木糖异构酶基因LbxylA的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备》

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《枸杞木糖异构酶基因LbxylA的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备》

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根据Lbxyl A基因序列设计荧光定量引物LbxylA-qRTF和Lbxyl A-qRTR（表1）。18S基因作为内参基因。在荧光定量PCR仪中进行扩增，反应体系为:SYBR?Green?Master?Mix?12.5?μL，上下游引物（10?μmol/L）各1?μL，cDNA模板5?μL，Millipore?H2O补足25?μL。反应条件为:95.0℃预变性3?min；循环为95.0℃变性10?s，55℃退火30?s，72℃延伸20?s，75℃读板5?s，共40个循环；溶解曲线从65℃上升到95℃，每次读板上升0.5℃。LbxylA在不同发育期果实中的相对表达量采用比较阈值法测定。通过计算2-ΔΔCt值确定该基因的相对表达量。