《表1 引物序列：草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP38的表达分析及多克隆抗体制备》

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《草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP38的表达分析及多克隆抗体制备》

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注：斜体碱基代表对应的酶切位点

根据草鱼Ⅲ型呼肠孤病（GCRV-104）的s10片段基因序列，使用Primer Premier 5.0软件设计ORF上游引物与下游引物，并分别插入限制性酶切位点和保护性碱基（引物序列见表1)；PCR反应为50μL体系，其中2×PrimeSTAR Max Premix 25μL，上下游引物各1μL（浓度为10 nmol/L)，cDNA模板（GCRV-104感染的CIK细胞cDNA为模板）1μL，无菌水22μL；按照98℃预变性3 min，98℃、10s，55℃、5s，72℃、5s，35个循环的程序进行PCR；用1%琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行分析；利用Wizard?SV Gel and PCR Clean-Up System对与目的基因大小一致的阳性条带进行割胶回收。