《表1 引物序列：黑果枸杞LrANS基因的克隆及表达分析》

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《黑果枸杞LrANS基因的克隆及表达分析》

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根据NCBI上已克隆的茄科植物ANS序列设计特异性引物（表1），以黑果枸杞叶片为材料，利用TaKaRa试剂盒提取总RNA，反转录合成cDNA为模板，利用Ex Taq酶进行PCR扩增反应获得LrANS基因的中间片段，将克隆获得的产物连接至pMD?19-T载体上进行测序，经Blast序列比对确定为LrANS基因目标序列。再根据已得到序列设计3′-RACE和5′-RACE特异性引物，按照TaKaRa公司的SMARTer?RACE5′-/3′-Kit说明书进行3′和5′-RACE PCR扩增反应，扩增产物连接至pMD?19-T载体上进行测序，经NCBI序列比对确定为目标序列，根据3个片段拼接成的LrANS基因cDNA序列设计验证引物，并进行LrANS基因cDNA全长序列扩增验证。