《表1 引物序列：烟草质膜ATPase4基因的克隆、表达载体构建及表达分析》

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《烟草质膜ATPase4基因的克隆、表达载体构建及表达分析》

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参考GenBank收录的绒毛状烟草ATPase4序列（序列号:XM＿016657566.1），采用同源克隆的方法，用Primer 5.0软件设计引物全长引物ATPase4-F和ATPase4-R（表1）。扩增反应程序为:95℃预变性5 min；95℃变性30 s；55℃退火30 s；72℃延伸3 min；35个循环。目的片段纯化后与pMD19-T载体于16℃连接过夜，连接产物转化大肠埃希菌DH5α感受态。随后在涂有卡那霉素LB平板上进行筛选，菌落PCR检测筛选阳性克隆，送至上海生物工程有限公司进行测序。