《表1 枇杷NAD-MDH基因克隆及载体构建引物序列》

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《枇杷果实中NAD-MDH基因克隆及植物表达载体构建》

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根据已有枇杷RNA-seq数据库筛选得到NAD-MDH基因保守区的核苷酸序列，设计NAD-MDH基因引物（表1），取逆转录产物1μL为模板，建立25μL如下PCR反应体系：10×Ex-Taq Buffer 2.5μL；dNTP Mixture（10 mmol·L-1）0.5μL；上、下游引物（10mmol·L-1）各0.5μL；cDNA模板，1μL；Ex-Taq（5U·μL-1），0.3μL，加ddH2O至25μL。按照如下扩增程序进行：94℃预变性5min；循环35个（94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸60s)；72℃8min。PCR产物经胶回收纯化后连接到pUCm-T载体上，用通用引物M13进行菌液PCR检测，筛选正确的阳性克隆子送深圳华大基因生物有限公司测序。