《表1 CsMYB基因gDNA克隆、启动子克隆和载体构建引物》

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《茶树CsMYB基因启动子的克隆与功能分析》

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注:下划线为酶切位点；阴影部分为保护碱基。Note:The bases with underline are the restriction site；The bases with shadow are the protecting bases.

首先，克隆带有酶切位点BamHⅠ和NcoⅠ的目的片段BamHⅠ-proMYB-NcoⅠ。通过DNAMAN 6.0软件分析启动子序列的酶切位点，结果显示CsMYB基因启动子序列不含有BamHⅠ和NcoⅠ酶切位点，启动子序列5′端和3′端分别设计引入酶切位点BamHⅠ和NcoⅠ的上下游引物Pro-F和Pro-R，同时在引物5′端添加相应的保护碱基，设计的引物见表1。以启动子序列分析正确的步骤1.2.3将大肠杆菌菌液进行扩繁提取质粒，并以相应质粒为模板，利用高保真酶KOD-Plus-Neo（code:KODo41）进行PCR扩增，回收纯化目的片段，克隆测序，序列比对正确后，产物命名为BamHⅠ-proMYB-NcoⅠ。