《表1 基因和启动子克隆以及载体构建所用到的引物》

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《颠茄AbCYP80F1基因的克隆与功能分析》

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用莨菪HnCYP80F1基因序列（登录号ABD39696）在颠茄转录组资源库中（http://medi cinalplantgenomics.msu.edu/）进行blastn检索，获得3条相似性大于90%的unigene序列。根据这3条序列，设计核心片段引物、5’RACE巢式引物和3’RACE巢式引物（表1），以相应的c DNA为模板进行基因的片段扩增和巢式RACE扩增，扩展片段胶回收后连接p MD19-T vector，然后转化大肠杆菌，取阳性克隆送测序。将这3段序列在Vector NTI 8.0软件中进行重叠分析，根据拼接得到的电子全长序列设计验证引物，用高保真酶进行PCR扩增和测序验证。