《表1 侵染缓冲液:植物凝集素MNB1基因启动子表达载体的构建及鉴定分析》

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《植物凝集素MNB1基因启动子表达载体的构建及鉴定分析》


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将阳性克隆菌接种于LB液体培养基(50 mg·L-1 Spec-壮观霉素,50 mg·L-1Gen-庆大霉素),28℃、220 r·min-1培养至OD600为0.5~0.8,5 000 r·min-1离心10 min,弃上清。按照表1配方配置侵染缓冲液,重悬沉淀,5 000 r·min-1离心10 min,弃上清,重复1次。加入适量缓冲液,将菌液稀释至OD600为0.5~0.8,再按比例加入终浓度为0.02%~0.03%的Silwet L-77,混匀。选取6周左右、生长状态良好的野生型拟南芥植株,提前去除果荚并给植株浇足水以保持足够湿度。将花置于侵染缓冲液中侵染20 s,使植株表面浸有一层水膜,侵染完成后,将植株避光培养24 h,于正常光照环境中继续培养。一周后进行二次侵染,无需去除果荚。