《表1 载体构建及PCR扩增所用到的引物》

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《CRISPR/Cas9介导的多基因编辑系统在大豆中的应用》

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后采用一步法，即分别以上一步得到的6个sg RNA表达盒（Gm AS1/2-sg RNA表达盒）和8个sg RNA表达盒（Gm SHP1/2-sg RNA、Gm AG-sg RNA、Gm STK-sg RNA表达盒）为模板，1.5μL混合位置特异性引物（表1），其中Gm AS1/2基因设计6个靶点用到的特异性引物为U3d、U3d、U3b、U3b、U6-1（PT5-B5'和PT5-B6）和U6-29(PT6-B6'和PT6-BL），GmSHP1/2、Gm AG和Gm STK基因用到的位置特异性引物分别为U3d、U3d、U3b、U3b、U6-1（PT5-B5'和PT5-B6）、U6-1(PT6-B6'和PT6-B7）、U6-29(PT7-B7'和PT7-B8）和U6-29(PT8-B8'和PT8-BL），1μL KOD-Plus(TOYOBO，上海），5μL 2 mmol/L d NTP，3μL 25 mmol/L Mg SO4，5μL 10×PCR Buffer for KOD-Plus，去离子水（dd H2O）补足，总体积为50μL，在PCR仪中进行22个循环，反应程序为：95℃10s，58℃15s，68℃20s。