《表2.本研究中所用到的PCR扩增引物》

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《新生隐球菌一个新的产孢相关蛋白Srp1的鉴定与功能分析》

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SRP1基因及蛋白序列获取数据库为FungiDB（Fungal and Oomycete Genomics Resources），使用BLASTP程序对蛋白数据库进行同源性搜索和对比分析。为了研究SRP1基因在隐球菌交配过程中的表达情况，我们采用实时荧光定量PCR技术检测了SRP1在mRNA水平上的变化情况。样品准备及操作方法如前述[14]。SRP1及内源参照基因GAPDH的扩增引物分别为TL537/TL538和TL217/TL218（详见表2）。为了分析SRP1基因的表达模式，以野生型菌株H99基因组DNA为模板利用引物TL877/878扩增一包含SRP1基因上游约1.5 kb基因编码序列（无终止密码子）片段，并通过体外同源重组方式克隆到载体pTBL3中得到pTBL131。pTBL131经Apa I酶切后分别转化到两交配型srp1Δ突变体中，经筛选验证后获得Srp1-mCherry融合荧光表达菌株。分别选取α和a交配型Srp1-mCherry融合荧光表达菌株设置交配实验并利用激光共聚焦荧光显微镜（Olympus，FV1200）观察荧光在隐球菌各发育阶段的定位情况。