《表1 本研究中所用到的PCR引物》

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《新型隐球菌临床菌株中CNAG＿01032基因的鉴定和功能研究》

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采用Split Marker策略，利用标记基因NEO替换目的基因。通过两步PCR法构建基因敲除片段（图1A），首先扩增野生型菌株基因组中CNAG＿01032基因上下游约1kb片段，同时从p JAF1中扩增NEO抗性基因；其次分别以上游或下游片段与NEO抗性基因的混合物为模板，扩增上游或下游片段与部分NEO抗性基因的融合片段。将上述两片段纯化冷冻浓缩后使用基因枪转入C1、C2菌株中，经200mg/L的G418筛选，并使用阴阳性引物（F3/R3、F4/TL59）对转化子进行PCR验证（表1），并通过Southern blot验证确认为CNAG＿01032基因缺陷株ΔC1、ΔC2（图1B）。