《表1 本研究中所用到的引物》

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《紫花苜蓿F-box蛋白基因MsFTL的克隆及功能分析》

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紫花苜蓿总RNA提取参照RNAiso plus试剂盒的说明书进行。以提取的RNA作为模板，反转录成cDNA，根据肇东苜蓿低温胁迫的转录组测序中得到的MsFTL基因的核苷酸序列，分析获得该基因的CDS序列，设计引物MsFTL-F和MsFTL-R（表1）。将上一步获得的c DNA进行稀释，利用ExTaq DNA polymerase（5 U/μL）进行PCR扩增。反应体系包含模板DNA（50 ng/μL）5μL、10×PCR Buffer 5μL、dNTP Mix4μL、ExTaq DNA polymerase 0.25μL、正、反向引物（10μmol/L）各2μL，用ddH2O补足至50μL。反应条件为94℃5 min；94℃30 s、50℃30 s、72℃90 s、30个循环。用1%琼脂糖凝胶分离PCR产物，将目的片段胶回收后与pMD18-T克隆载体连接，送至上海生工公司测序。