《表1 本研究PCR扩增引物引物序列》

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《高通量测序技术在水生态污染监测中的应用》

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DNA提取采用CTAB[6]法标准化操作流程，然后采用琼脂糖凝胶电泳进行DNA浓度和纯度检测。最后取适量的样本DNA于离心管中，使用无菌水稀释样本至1 ng/μL作为基因组DNA模板。根据待测序区域的选择，使用带Barcode的特异引物（New England Biolabs公司的PhusionHigh-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer）和高效高保真酶进行PCR，确保扩增效率和准确性。本研究选择针对原核生物16S rRNA基因中高度变化的V4区域[7]以及真核生物18S rRNA的V4区域[8]的引物作为扩增子，详见表1。PCR的反应条件为:95℃5 min，94℃60 s，57℃45 s，72℃60s，共34个循环，最后72℃终延伸10 min，16℃5min。PCR产物通过2%的琼脂凝胶电泳检测。根据PCR产物的浓度对样品进行等量混合，然后使用1×TAE浓度2%的琼脂糖胶电泳对PCR产物进行纯化，将剪切得到的目标条带使用试剂盒回收产物，试剂盒为Thermo Scientific公司Gene JET胶回收试剂盒。