《表1 本研究所用的PCR引物序列》

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《小拟南芥转运蛋白基因及NHX2基因的克隆与表达》

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注:下划线代表限制性内切酶的酶切位点。

采用qRT-PCR进行基因的组织表达分析。Ap N-HX2基因引物为qRT-ApNHX2-F和qRT-ApNHX2-R，选择GAPDH作为内参基因[35]，引物为GAPDH-F和GAPDH-R（表1）。qRT-PCR采用Fast SYBR Mixture试剂盒（康为世纪），利用美国ABI 7500 Fast实时荧光定量PCR仪（Life Technologies，Foster City，CA，USA）进行扩增。在10μL的反应体系中加入c DNA模板2μL，Ultra SYBR Mixture 5μL，ROX 0.2μL，正反向引物（10μM）各0.2μL，ddH2O 2.6μL。反应程序为95℃预变性10 min；95℃变性15 s，60℃退火1 min，共40个循环；60℃读取荧光值。检测每份样品的ApNHX2基因和GAPDH内参基因的Ct值，每份样品3次重复，实验数据采用2-ΔΔCt法进行相对定量分析[23]。采用SPSS17.0软件对实验结果进行单因素方差分析，利用Duncan法进行多组样本之间的差异显著性分析（P<0.05）[32]。