《表1 本研究所用PCR引物列表》

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《草酸青霉纤维素酶基因和木聚糖酶基因的调控基因POX05145的鉴定》

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将5μg POX05145敲除盒DNA和1μL100 mmol/L亚精胺溶液加入到100μLΔPoxKu70原生质体中。28℃恒温箱培养4～5 d后转化板长出孢子。将转化板进行单胞分离。挑选单菌落，提取单菌落总DNA，进行PCR验证。以突变株ΔPoxKu70与ΔPOX05145候选转化子总DNA为模板，分别用引物对POX05145VF/POX05145VR、POX05145-left-F/G418-R、G418-F/POX-05145-right-R进行PCR扩增（表1）。若POX05145被敲除成功，以ΔPOX05145候选转化子总DNA为模板用引物对POX05145VF/POX05145VR不能扩增出条带，而用引物对POX05145-left-F/G418-R与G418-F/POX05145-right-R可以扩增出预计大小的条带。Southern杂交验证采用提取草酸青霉ΔPoxKu70总DNA和突变株ΔPOX05145-3、ΔPOX05145-5、ΔPOX05145-8总DNA，用限制性内切酶Bam HⅠ进行酶切，探针为POX05145上游同源臂处的一段DNA序列（表1）。