《表1 本研究所用实时定量PCR引物》

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《二甲双胍对人胚肾HEK293T细胞增殖、凋亡和Cyclin D1表达的影响》

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将对照组、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L的细胞用二甲双胍处理48h后，采用实时定量PCR技术检测Cyclin D1的mRNA转录水平表达。在药物干预48h后，采用Trizol提取细胞的总RNA，并通过琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性，通过分光光度计检测总RNA的浓度和纯度。用1μl的总RNA进行反转录合成第一链cDNA模板。实时定量PCR引物如表1所示。实时定量PCR在ABI 7500 Real-timePCR system已经进行反应，反应条件为:初始变性95°C 30s之后进入40个循环:95°C 10s，60°C 30s。每个反应3个重复。相对定量值用RQ=2-ΔΔct进行计算[10]。PCR反应后采用融解曲线法检测扩增条带是否单一。